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細胞凋亡

Annexin V, FITC標記

產(chǎn)品編號:E0202       CAS#:       Ex (nm):494 Em(nm):            分子式: 分子量:E0202        溶劑:Water        包裝:100test 供貨狀態(tài):3-5天        儲存條件:低溫避光-20 零售價(jià)格: 2544.00

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產(chǎn)品描述

膜聯(lián)蛋白是在鈣存在下與磷脂膜結合的蛋白質(zhì)家族。膜聯(lián)蛋白V是研究細胞凋亡的有用工具。它被用作探針以檢測在細胞表面上表達磷脂酰絲氨酸的細胞,這是細胞凋亡中發(fā)現的特征以及其他形式的細胞死亡。有多種參數可用于監測細胞活力。膜聯(lián)蛋白V-染料結合物廣泛用于通過(guò)測量磷脂酰絲氨酸(PS)的易位來(lái)監測細胞凋亡。在細胞凋亡中,PS被轉移到質(zhì)膜的外部小葉。磷脂酰絲氨酸在細胞表面上的出現是細胞凋亡的初始/中間階段的通用指示,并且可以在觀(guān)察到形態(tài)變化之前檢測到。該熒光FITC-膜聯(lián)蛋白V綴合物廣泛用于通過(guò)流式細胞儀或熒光顯微鏡監測細胞凋亡。對于基于膜聯(lián)蛋白V的細胞凋亡檢測的微孔板檢測,我們建議您使用我們的Cell Meter 試劑盒。

 

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱(chēng)

規格

價(jià)格

E0202

Annexin V, FITC標記

100 tests

2544RMB

操作步驟

1.用膜聯(lián)蛋白V綴合物制備和孵育細胞:

1.1     制備膜聯(lián)蛋白V綴合測定緩沖液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

1.2     用測試化合物處理細胞一段所需的時(shí)間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時(shí))以誘導細胞凋亡。

1.3     離心細胞,得到1-5×10 ^5個(gè)細胞/管。

1.4     將細胞重懸于200μLAnnexin V結合測定緩沖液中(來(lái)自步驟1.1)。

1.5     在細胞中加入2μL膜聯(lián)蛋白V結合物。

可選:在細胞內加入死細胞染色劑如碘化丙錠,用于壞死細胞。

1.6     余ncubate在室溫下進(jìn)行30至60分鐘,避光。

1.7     在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前,加入300μLAnnexin V結合測定緩沖液(來(lái)自步驟1.1)以增加體積(參見(jiàn)下面的步驟1.8)。

1.8     使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監測熒光強度(參見(jiàn)下面的步驟2或3)。

2.使用流式細胞儀分析:

通過(guò)使用具有適當過(guò)濾器的流式細胞儀來(lái)量化膜聯(lián)蛋白V綴合物。

注意:粘附細胞上的膜聯(lián)蛋白V 結合流式細胞術(shù)分析未經(jīng)常檢測,因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。

3.使用熒光顯微鏡分析:

3.1     移液器從步驟1.6,將細胞懸浮液沖洗1-2次用甲nnexin V-結合測定緩沖液(來(lái)自步驟1.1) ,然后與A重懸細胞 nnexin V-結合測定緩沖液(來(lái)自步驟1.1) 。將細胞添加到蓋有玻璃蓋玻片的載玻片上。

注意:對于粘附細胞,建議直接在蓋玻片上生長(cháng)細胞。與膜聯(lián)蛋白V綴合物(步驟1.6)孵育后,用Nnexin V結合測定緩沖液(來(lái)自步驟1.1)沖洗1-2次,并將A nnexin V結合測定緩沖液(來(lái)自步驟1.1)加回到蓋玻片中。在玻璃載玻片上翻轉蓋玻片并觀(guān)察細胞。在與膜聯(lián)蛋白V綴合物孵育后,細胞也可以在2%甲醛中固定,并在顯微鏡下觀(guān)察。

3.2     在熒光顯微鏡下用適當的濾光片分析膜聯(lián)蛋白V綴合物的凋亡細胞。



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