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細胞凋亡

Cell Meter APC-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒 適合于流式細胞儀

產(chǎn)品編號:E0701       CAS#:       Ex (nm):651 Em(nm):            分子式: 分子量:E0701        溶劑:        包裝:100test 供貨狀態(tài):3-5天        儲存條件:低溫避光-20 零售價(jià)格: 2544.00

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產(chǎn)品描述

膜聯(lián)蛋白V可以與包括APC的熒光染料綴合。這種形式保留了其對磷脂酰絲氨酸(PS)的高親和力,因此可用作流式細胞儀分析正在經(jīng)歷細胞凋亡的細胞的敏感探針。由于PS的外化發(fā)生在細胞凋亡的早期階段,APC膜聯(lián)蛋白V染色可以在比基于核變化(例如DNA片段化)的測定更早的階段鑒定細胞凋亡。 APC膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失,這伴隨著(zhù)由細胞凋亡或壞死過(guò)程引起的最新細胞死亡階段。因此,APC膜聯(lián)蛋白V染色通常與重要染料如碘化丙啶(PI)或7-氨基放線(xiàn)菌素(7-AAD)聯(lián)合使用,以使研究人員能夠識別早期凋亡細胞(7-AAD陰性,APC)膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性)。具有完整膜的活細胞排除7-AAD,而死亡和受損細胞的膜對7-AAD是可滲透的。例如,被認為存活的細胞是APC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性,而早期細胞凋亡的細胞是APC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性,而晚期凋亡或已經(jīng)死亡的細胞都是APC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性。該測定不區分經(jīng)歷凋亡性死亡的細胞與由于壞死途徑而死亡的細胞,因為在任一情況下,死細胞將用APC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色。然而,當隨時(shí)間測量細胞凋亡時(shí),通??梢詮腁PC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性(存活或無(wú)可測量的細胞凋亡)追蹤細胞,APC膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性(早期細胞凋亡,膜完整性存在) )最后到APC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性(末期凋亡和死亡)。細胞通過(guò)這三個(gè)階段的運動(dòng)表明細胞凋亡。相比之下,單個(gè)觀(guān)察結果表明細胞本身是APC膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性,它們揭示了關(guān)于細胞經(jīng)歷其死亡的過(guò)程的較少信息。

 

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱(chēng)

規格

價(jià)格

E0701

Cell Meter APC-Annexin V細胞凋亡檢測試劑盒 適合于流式細胞儀

100 Tests

2544RMB

儲備溶液配制

1. APC-Annexin V原液(100X):
將含有0.2%BSA的200μLPBS加入到APC-膜聯(lián)蛋白V綴合物(組分A)的小瓶中并充分混合以制備100X APC-膜聯(lián)蛋白V儲備溶液。 注意:將重構的100X APC-Annexin V儲備溶液儲存在4 ℃。 除非另有說(shuō)明,否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣,并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環(huán)。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段所需的時(shí)間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時(shí))以誘導細胞凋亡。注意:膜粘附細胞的膜聯(lián)蛋白V流式細胞術(shù)分析未經(jīng)常檢測,因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。

2.離心細胞,得到1-5×105個(gè)細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液(組分B)中。

4.向細胞中加入2μL100XAPC-膜聯(lián)蛋白V原液。

5.可選:將2μL100X碘化丙啶(組分C)加入細胞中,用于壞死細胞。

6.在室溫下孵育20至60分鐘,避光。

7.可選:在使用流式細胞儀分析細胞之前,添加200至300μL的測定緩沖液(組分B)以增加體積。

8.使用具有FL4通道的流式細胞儀(Ex / Em = 635 / 660nm)監測APC-膜聯(lián)蛋白V的熒光強度。當碘化丙啶加入細胞時(shí),使用FL2通道測量細胞活力。



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